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【药研分析】外标法?内标法?没那么难选择!
发表于:2019-09-09 浏览:873

  一、外标法


  外标法比较简单,通过比较已知浓度的峰面积和未知物的峰面积,从而计算出未知物的含量,如table 1的数据: 浓度点是 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, and 1000 ng/mL


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  做出的校准曲线 figure 1:


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  x轴是浓度点,y对应的是相应的相应值

  当欲测组分含量变化不大,并已知这一组分的大概含量时,也可以不必绘制标准工作曲线,而用单点校正法,即直接比较法定量。单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。因此,当方法存在系统误差时(即标准工作曲线不通过原点),单点校正法的误差较大。因此规定,y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。

  标准曲线法的优点:绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了,计算时可直接从标准工作曲线上读出含量,这对大量样品分析十分合适。特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间,在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正,以确定该标准工作曲线是否还可使用。

  标准曲线法的缺点:每次样品分析的色谱条件(检测器的响应性能,柱温度,流动相流速及组成,进样量,柱效等)很难完全相同,因此容易出现较大误差。另外,标准工作曲线绘制时,一般使用欲测组分的标准样品(或已知准确含量的样品),因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿。


  二、内标法


  内标法就是向标样和样品中加入一样浓度的内标,用标样与内标的响应值的比率和样品与内标的响应值的比率相比较,从而计算出未知物的含量 ,同样根据table 1 的数据做出校准曲线 figure 2


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  x轴是浓度点,y轴是 标样与内标的响应值的比率,如果内标是在前处理前加入,那么考量的是整个前处理流程和进样系统的变化,如果内标是在前处理后加入,那么考量的是进样系统的变化

  内标法的关键是选择合适的内标物。内标物应是原样品中不存在的纯物质,该物质的性质应尽可能与欲测组分相近,不与被测样品起化学反应,同时要能完全溶于被测样品中。内标物的峰应尽可能接近欲测组分的峰,或位于几个欲测组分的峰中间,但必须与样品中的所有峰不重叠,即完全分开。

  内标法的优点:进样量的变化,色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响不大,特别是在样品前处理(如浓缩、萃取,衍生化等)前加入内标物,然后再进行前处理时,可部分补偿欲测组分在样品前处理时的损失。若要获得很高精度的结果时,可以加入数种内标物,以提高定量分析的精度。

  内标法的缺点:选择合适的内标物比较困难,内标物的称量要准确,操作较麻烦。使用内标法定量时要测量欲测组分和内标物的两个峰的峰面积(或峰高),根据误差叠加原理,内标法定量的误差中,由于峰面积测量引起的误差是标准曲线法定量的2-2是由于进样量的变化和色谱条件变化引起的误差,内标法比标准曲线法要小很多,所以总的来说,内标法定量比标准曲线法定量的准确度和精密度都要好。


  三、是外标法还是内标法?


  如果前处理流程比较简单,进样也很准确,那么可以选择外标法,譬如前处理只是超声过滤一下,然后还是自动进样

  如果前处理流程复杂,进样也不是很准确,譬如手动进样,那么可以选择内标法

  如何选择呢?简单的做法就是同时用外标法和内标法去测试样品,比较测试误差,通过比较误差的大小来选择合适的校准方式


  四、标样加入法


  不论是外标法还是内标法,在配置标准曲线的时候,要用基质空白试剂(含有基质但不含有标准物质的空白试剂)去稀释定容标准曲线,这样能够很好的反映出基质对信号的抑制或者放大。

  如果找不到基质空白的试剂呢?可以选择标样添加法,向含有未知含量的基质试剂中加入一定浓度的标样,如table 1的数据,用含有未知含量的基质试剂配置0, 1, 2, 5, 和 10 ng/m的曲线,如figure 3


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  会发现,x轴有明显的截距,截距的大小反映的就是基质中未知物的多少标准加入法的优点:不需要另外的标准物质作内标物,只需欲测组分的纯物质,进样量不必十分准确,操作简单。若在样品的前处理之前就加入已知准确量的欲测组分,则可以完全补偿欲测组分在前处理过程中的损失,是色谱分析中较常用的定量分析方法。标准加入法的缺点:要求加入欲测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同,以保证两次测定时的校正因子完全相等,否则将引起分析测定的误差。


  五、结论


  外标法比较简单,但适用于前处理流程比较简单,进样也很准确的方法;

  内标法虽然可以很好的提高方法的准确度和精确度,但需要选择合适的内标,同时成本也会有所上升;如果找不到空白的基质试剂,可以选择标样添加法。


  转自:实验室ISO17025

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