当前位置: 首页 > 新闻公告 > 药物分析
【药研分析】液相色谱色谱图异常问题解析
发表于:2019-10-16 浏览:867

  你在液相色谱使用过程中是不是会遇到各种各样的问题,别担心,本文针对色谱图的异常问题进行了整理,并给出解决方法,供大家参考。


  色谱图中未出峰

  解决方法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。


  一个峰或几个峰是负峰

  解决方法:流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。


  所有峰均为负峰

  解决方法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。


  所有峰均为宽峰

  解决方法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。


  所出峰比预想的小

  解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。


  保留时间变化

  可能的原因 : 解决方法

  1.柱温变化 : 柱恒温

  2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

  3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液

  4.柱污染 : 每天冲洗柱

  5.柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相

  6.柱快达到寿命 : 采用保护柱


  保留时间缩短

  可能的原因 : 解决方法

  1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速

  2.样品超载 : 降低样品量

  3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3-7.5检查柱的方向

  4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀

  5.温度增加 : 柱恒温


  保留时间延长

  可能的原因 : 解决方法

  1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡

  2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱

  3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3-7.5检查柱的方向

  4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀

  5.温度降低 : 柱恒温


  肩峰

  可能的原因 : 解决方法

  1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

  2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂

  3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

  4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

  5.进样器损坏 : 更换进样器转子


  鬼峰

  可能的原因 : 解决方法

  1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

  2.样品中未知物 : 处理样品

  3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)

  4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂

  5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水


  基线噪声

  可能的原因 : 解决方法

  1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压

  2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂

  3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯

  4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)

  5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压


  峰拖尾

  可能的原因 : 解决方法

  1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相

  2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相,使用更长的色谱柱

  3.硅羟基作用:加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品

  4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

  5.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

  6.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管

  7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱,活化色谱柱


  峰展宽

  可能的原因 : 解决方法

  1.进样体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

  2.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散

  3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点

  4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

  5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相

  6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器

  7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

  8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小

  9.样品过载 : 进小浓度小体积样品


  峰分叉

  可能的原因:解决方法

  1.保护柱或分析柱污染:取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

  2. 样品溶剂不溶于流动相:改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。


  基线漂移

  可能的原因:解决方法

  1、柱温波动(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器):控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器

  2、流动相不均匀(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移):使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。

  3、流通池被污染或有气体:用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

  4、检测器出口阻塞(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线):取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

  5、流动相配比不当或流速变化:更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

  6、柱平衡慢:特别是流动相发生变化时,用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

  7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成:检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

  8、样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线:使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

  9、使用循环溶剂,但检测器未调整:重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。

  10、检测器没有设定在最大吸收波长处:将波长调整至最大吸收波长处。


  以下文章来源于液相色谱之家 ,作者小官人

  声明:药研江湖对所有公众号产生内容保持严谨、中立的态度。文章仅供交流学习使用。如遇到内容有误,请与我们联系进行讨论和修改。(010-65104668)


1-参比购.jpg



电话:15810509002
地址:北京市朝阳区华腾世纪总部公园H座13A-C
邮箱:szhang@indoocro.com
公众号:铭研医药
微信客服:canbigou
Copyright©2018 Beijing Health China Medical Research Center All rights reserved. 京ICP备16010808号-4